Идентификация видов Candida в клинической лаборатории: Тест зародышевой трубки, образование хламидоспор и температура роста

Тест зародышевой трубки, образование хламидоспор и температура роста.

Тест зародышевой трубки считается простой, экономичной и эффективной процедурой для дифференциации C. albicans от других видов Candida. Он основан на наблюдении, что C. albicans образует трубчатые структуры (называемые зародышевыми трубками) при инкубации в сыворотке в течение 2–4 часов при 37 ° C. Зародышевая трубка или псевдогифы - это несептатное продолжение дрожжевой клетки, которое отличается от настоящих гиф отсутствием сужений в месте соединения с клеткой. Тест на зародышевые пробирки представляет собой тест для быстрой идентификации C. albicans, который можно проводить на первичных или очищенных культурах. На формирование зародышевых трубок в сыворотке или аналогичной среде могут влиять различные факторы окружающей среды, такие как температура, концентрация инокулята, состав среды, виды и штаммы Candida. Сыворотка человека, по-видимому, является лучшей добавкой среды для идентификации C. albicans по сравнению с лошадиной, кроличьей или некоторыми другими средами, включая сыворотку животных и RPMI. Сыворотка человека показала чувствительность 98% и специфичность 100% при инкубации до 2 часов. Одно из возможных беспокойств по поводу этой техники.

заключается в том, что некоторые виды Candida, не относящиеся к albicans, такие как C. dubliniensis, C. tropicalis и C. parapsilosis, также могут образовывать зародышевые трубочки или псевдогифы в сыворотке, что приводит к неправильной идентификации, если выполняются только поверхностные тесты.

Образование хламидоспор является особенностью C. albicans, C. dublinensis и очень редко некоторых изолятов C. tropicalis. Фактически, с помощью техники Далмау большие хламидоконидии с сильно преломляющими стенками могут быть видны как терминальные или на коротких боковых ветвях у изолятов C. albicans. Считается, что они представляют собой спящие формы роста, которые возникают в условиях истощения питательных веществ. Хотя агар с кукурузной мукой и рисовым экстрактом является наиболее известной средой, индуцирующей хламидоспоры, был предложен ряд других сред для выращивания.  Другие среды, которые также позволяют идентифицировать C. dubliniensis по образованию хламидоспор, включают агар с семенами подсолнечника, табачный агар и агар Staib. Формирование хламидоспор у C. dubliniensis может радикально отличаться от такового у C. albicans, при этом хламидоспоры часто прикрепляются парами, тройками или более крупными кластерами к одной и той же суспензорной клетке, а не по отдельности на концах гиф (или псевдогиф) у C. albicans. . Однако этот паттерн может быть не таким последовательным у всех штаммов следовательно, для различения двух видов могут потребоваться дополнительные тесты.

Дифференциальная температура - это простой и недорогой тест для идентификации изолятов C. dubliniensis, которые демонстрируют плохой рост или его отсутствие при 42 ° C или 45 ° C, тогда как C. albicans хорошо растет при этих температурах.

Выводы

Быстрое и точное определение болезнетворных видов Candida имеет решающее значение для клинического лечения местного или системного кандидоза. Преждевременная диагностика инвазивных грибковых инфекций проблематична, поскольку большинство клинических признаков и симптомов неспецифичны, а посевы часто бывают отрицательными или становятся положительными слишком поздно для начала эффективной противогрибковой терапии. Поэтому было разработано несколько исследований для улучшения новых технологий диагностики инвазивного кандидоза. Традиционная методология давно используется в качестве эталонных процедур идентификации видов Candida. Однако эти методы трудоемки, требуют много времени и ненадежны для определения широкого спектра видов Candida и обычно требуют дополнительных тестов. Учитывая ограничения традиционных методов, было разработано несколько коммерческих систем для быстрой идентификации дрожжей в течение 1,5-72 часов. Хотя эти системы широко используются для идентификации Candida, их использование ограничено, и некоторые виды не могут быть идентифицированы и дифференцированы. Сегодня молекулярные стратегии, такие как методы, основанные на ПЦР или не на основе ПЦР, используются в качестве дополнения к традиционным методам и обеспечивают более точные результаты за меньшее время (от 1,5 до 3 часов). Учитывая высокую точность и скорость, с которой могут быть выполнены методы молекулярного типирования, а также быстрое развитие технологий, вероятно, что большинство из этих методов могут улучшить рутинную клиническую лабораторную идентификацию видов Candida. Однако для стандартизации таких технических процедур необходимы дальнейшие исследования.